核酸检测要求

   2023-05-17 01:12:04 网络1100
核心提示:检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR(聚合酶链式反应)。因PCR反应模板仅为DNA,因此在进行PCR反应前,应将新型冠状病毒核酸(RNA)逆转录为DNA。在PCR反应体系中,包含一对特异性引物以及一个Taqman探针,该探

核酸检测要求

检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR(聚合酶链式反应)。因PCR反应模板仅为DNA,因此在进行PCR反应前,应将新型冠状病毒核酸(RNA)逆转录为DNA。

在PCR反应体系中,包含一对特异性引物以及一个Taqman探针,该探针为一段特异性寡核苷酸序列,两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;

如反应体系存在靶序列,PCR反应时探针与模板结合,DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解,报告基团与淬灭基团分离,发出荧光。

每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(Ct值)与病毒核酸浓度有关,病毒核酸浓度越高, Ct值越小。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值。

扩展资料:

一是采样质量,二是疾病不同时期(早期上呼吸道、晚期下呼吸道、康复期)。

核酸检测盒对不典型和混合型新冠状病毒病毒检测具有特异性的效果,也就是说对上呼吸道检测灵敏的较高,而对于下呼吸道以及康复期内的患者检测,专家个人看法,

可考虑病毒在人体内2-4周后产生抗体,将核酸检测与血清学(抗体)一同检测,联合起来提高检测效率。

参考资料:

百度百科——核酸检测法

探针和引物区别

引物合成后,经过一系列处理和纯化步骤,旋转干燥而成片状物质。没有溶解的引物非常稳定,-20 ℃下可保存2-3年,甚至更长。溶解后的引物-20 ℃下避免反复冻融,可以保存至少半年以上。如果对实验的重复性要求较高,合成的OD值较大,建议将溶解好的引物事先稀释为100 μmol/L的储存液,分装数份保存于-20 ℃冰箱。使用前,将浓溶液稀释成工作液(10 pmol/μl或20 pmol/μl)后进行实验。修饰荧光引物需要避光保存。

不会降解,干燥的引物在常温至少可以稳定存放二周以上。而一般的运输时间通常都在1-3天,所以您收到的引物不会降解。

干燥后的引物质地非常疏松,开启瓶盖溶解之前最好在3000-4000转/分钟 的转速下离心1分钟,或管垂直向上在桌面上轻敲几次,将引物粉末收集到管底,防止开盖时引物散失。根据计算出的体积加入去离子无菌水或10 mM Tris pH 7.5缓冲液,室温放置几分钟,上下混匀振荡,离心将溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸馏水,因为有些蒸馏水的pH值比较低(pH 4-5),引物在这种条件下不稳定。

如果溶解引物的水PH过低或污染了菌或核酸酶,会使引物降解。使用时没有充分解冻混合,液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物,避免反复冻融,并使用10 mM Tris pH 7.5缓冲液溶解引物。

基因探针,即核酸探针,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件:①应是单链,若为双链,必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。

引物,又名引子。是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,在核酸合成反应时,作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链,之所以需要引物是因为在DNA合成中DNA聚合酶仅仅可以把新的核苷酸加到已有的DNA链上。

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