wb电泳失败解决方式如下：
电泳失败解决办法：1、尽量不使用两边的两孔 、其他电泳过程出现的问题现象有没有整个条带呈“︶”状：或者凝胶冷却不均一，电泳槽老化等。这时候胶分辨率不够大片段运动时速度很慢，片段之间的距离就拉不开，肉眼也看不清条带。
Western blot实验最常见的10个问题及解决方案
<故障1>手工粘接电泳槽的铂金电极孔处漏液
该处可能是因为电泳槽工作时间较长所至，对此应使用堵漏胶（稠合液）进行封堵即可。
<故障2>模具水平电泳槽电极孔处漏液
检查电极下的密封圈是否被螺丝拧紧在正确位置或已经损坏。如有损坏需更换密封胶圈。
<故障3>电泳槽有机板粘接处漏液或开胶
有机板开胶此类情况不宜发生，若发现开胶我们可以就地取材使用三氯甲烷进行局部粘接，等胶粘剂凝固后再用堵漏胶粘剂（稠合液）进行封堵即可。
<故障4>电泳槽密封条漏液（垂直槽）
一般情况下，电泳槽较窄的密封条不易漏夜，反之较宽的则比较容易漏，此时先检查：
密封条是否老化或损坏，若已经老化或损坏，应更换密封条。
如果密封条完好无损，目测检查密封条是否有凹凸不平现象，如果有应将密封条拆下进行重新安装。安装时注意不要拉扯密封条，使其自然地嵌入密封槽内，并保证安装均匀，避免密封条出现凹凸现象。
如果缓冲液是从密封条的中间漏出，则说明漏处比两边凹（不在同一水平线上），我们则需要把密封条拆下，清理干净槽内胶粘剂，然后再将薄厚相当的窄边条（如0.4毫米）粘在槽内，以垫起凹下的密封条，使其与两边保持一致，此后再将密封条粘在槽内即可。
<故障5>电泳槽内无电流（铂紧电极上无气泡）
首先利用万用表检查电泳仪有无输出电压（注意选择直流电压挡，输出不得超过量程，以免损坏万用表）
阴极电泳槽表面出现泡沫怎么处理?
1. Western Blot原理 Westernblot的原理是蛋白质在电力场的作用 下，由大到小的进行排列，利用电泳进行分离和富集。拥有抗原表位的蛋白质分子被抗体（一抗）特异性识别并与之结合。在此基础上，酶或荧光标记的二抗识别并结合一抗，通过与底物反应显色来观察目的蛋白。
Westernblot显色的方法主要有以下几种：（1）放射自显影（2）底物化学发光ECL（3）底物荧光ECF（4）底物DAB呈色。现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色。大部分Westernblot显色底物是化学发光底物，发表文章通常也是用底物化学发光ECL 。
2. 目的蛋白信号弱或无
在
Westernblot发光检测中常见的问题之一就是目的蛋白信号弱或无。首先考虑是否转膜不充分/过转，如果是，则要优化转膜条件；其次，在转膜合适的前提下考虑是否抗体-抗原敏感性过低，也可能是底物HRP或底物活性降低，可以通过加大上样量/提高抗体浓度/使用敏感底物/延长压片时间解决。凝胶太厚，曝光时间短也会使蛋白信号降低，因此，要延长转膜时间和胶片的曝光时间。
3. 非特异性条带 非特异性条带与抗体交叉反应有关。单抗比多抗特异性好，纯度高，另外适当稀释一抗/二抗浓度，也是有必要的。如果样本在处理过程中发生降解，则样本处理时加入蛋白抑制剂在冰上操作。
4. 显影后膜上条带处变为黄色或白色可能是HRP过高导致的敏感性或背景太高，应降低抗体浓度。 5. 条带内无显影的白点
一般是与转膜和显影的操作有关 ，转膜前尽量将膜平衡，并注意胶和膜之间避免气泡，显影时膜与X光片间也应避免气泡。
6.存在散在小圆斑
牛奶封闭液中的杂质颗粒导致，解决此类问题可提前配置好封闭液于4度保存，使用时勿混匀，仅用上层。
7. Western Blot化学发光(ECL)淬灭的原因？
Western Blot“淬灭”的原因主要在两方面：含HRP的抗体和发光试剂。由于长期应用某种发光试剂，人们多注意了抗体，不知道发光试剂其实也会对实验结果造成重大影响。对抗体方面来说，可以采用适当降低抗体的浓度，发光实验时快速操作来解决“淬灭”的问题；对发光试剂来说，可以选用发光稳定的发光试剂来解决“淬灭”的问题。
8. Western Blot背景太高
背景深是在Western blot发光检测中最常见的问题，造成背景深的原因很多。第一，封闭的问题，封闭条件一般为5%牛奶或BAS室温封闭2-4h，但最好4度过夜；实际上牛奶对于多数抗体来说效果不错，但二抗与牛奶可能有交叉反应，因此洗涤很重要。另外BSA蛋白单一，可降低因牛奶其他成分引起的背景。第二，TBST洗脱不彻底也会导致背景深，适当增加洗脱时间、次数、用量可以减轻背景颜色，有时候膜没有完全均匀的浸润也是原因之一。第三，条带背景深也与曝光时间有关，曝光时间超过半小时出现背景是很正常的，所以可以的话建议曝光1-10min。第四，抗体浓度太高也会导致背景高，建议实验前进行检测。
9. Western Blot中Tween-20的作用是什么？应该怎么用？
Tween-20是一种非离子型表面活性剂。用途为水包油乳化剂、可用作溶剂、扩散剂、稳定剂、润滑剂和抗静电剂等。气相色谱固定液(最高使用温度120℃)分离分析挥发油、脂肪酸酯、醇、酮和卤化物。
Westernblot的操作流程中大部分都用到TBST洗液，而且还是封闭，一抗二抗孵育这种比较关键的步骤。通常Tween-20作为一种非离子型表面活性剂，效果和SDS、BSA作用差不多。由于膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替，因此在封闭时可使用Tween20清除去污剂，而且浓度不要超过0.3%（0.05%效果最好），如果牛奶封闭效果不好可以提高吐温浓度。
在WB洗液里的吐温是和BSA一样，对抗原抗体蛋白提供保护作用，同时因为是表面活性剂（司盘加成亲水的环氧乙烷基团后的化合物），可以减少抗体对抗原的非特异性作用，用于洗脱未结合的抗体、减少非特异性结合。Tween-20是我们用TBST的时候Tween-20得用量是0.5ml/L，不加SDS。
10. 出现变形条带
凝胶存在气泡或是杂质、电流不稳定、凝胶冷切不均匀。制胶器具和电泳槽保持干净，换新的电解液，保证材料无污染，制胶过程中清除气泡。如电泳槽老化建议换新。尽量选择中间孔加入样品，避免两端上样。
WB电泳槽不能漏水吗
槽液起泡一般是三种原因：
1 由于电泳系统管路中泵，阀门泄漏造成暴气；2主、副槽溢流落差太大造成起泡；3由于循环不足，造成槽液表面不畅，以致于涂装件从入口带进的气泡不易消失且越积越多。相对应的处理方法有：1 检修系统有关泵、阀门的设备
2,调整溢流堰高度，减少落差
3，检查循环系统相关设备的工作状况正常与否，如有必要则须维修。必要时，还需要倒槽，清槽。一般有经验的电泳公司在帮你建槽的时候都会提前检测好杜绝这种情况发生，我们公司的电泳槽就是深圳志邦电泳组装的，用几年了都没发生过这问题，你也可以去了解下哦。
希望对你有帮助！
不能漏水。
玻璃板侧方或下方不小心因磕碰受损，这样玻璃板受损处则不再平整，液体会从这些部位漏出。这种情况下只能更换玻璃板，而很多垂直槽的玻璃板和边条压片是粘在一起的，这种情况则需要一起更换。有时由于清洗不到位，边条压片表面会有污物凸起，也会导致两侧不能密闭夹紧而漏胶。
电泳槽是凝胶电泳系统的核心部分，其系统的迅猛发展主要也是体现在电泳槽上。根据电泳的原理，凝胶都是放在两个缓冲腔之间，电场通过凝胶连接两个缓冲腔。缓冲液和凝胶之间的接触可以是直接的液体接触，也可以间接通过凝胶条或滤纸条。
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