碱性磷酸酶底物溶液:
1)NBT(氮蓝四唑)溶液:在10ml 70%的而甲基酰胺中溶解0.5gNBT。
2)BCIP(5-溴-4-氮-3-吲哚磷酸)溶液:在10ml 70%的而甲基酰胺中溶解0.5g BCIP。
3)碱性磷酸酶缓冲液:100mmol/LNaCl;5mmol/L MgCl2;100mmol/L Tris-HCl(pH9.5),置密闭容器中保存,此溶液稳定。
4)取66rdNBT溶液与10ml碱性磷酸酶缓冲液混匀,加入33plBCIP溶液。
5)辣根过氧化物酶底物溶液:用9ml的0.01mol/L Tris-Cl(pH7.6)溶液中溶解6mg 3—3,—二氨基联苯胺,加入lml 0.3%(w/v)NiCl2或CoCl2,用Whatmanl号滤纸过滤以除去沉淀,加入10yB0%H202混匀后立即使用。此溶液须在临用时配制。
ll37用什么配
1、底物浓度:除选择适合的底物外,在实际应用中更多考虑的是底物浓度。由于[S]与反应速度V成双曲线关系,在酶活性测定时,要求[S]达到一定水平以保证酶活性与酶量成正比。
2、酶浓度:在反应条件一定时,酶浓度与反应速度成正比。按照中间产物学说,只有[S]>>[E]时,酶才能被底物分子饱和,反应速度才能达到最大值。因此当标本酶活力过高时,应将标本适当稀释后再加以测定。
3、温度:不同的酶最适温度可以不同,多数酶的最适温度在37~40℃。高于或低于最适温度,酶活性都降低。
4、离子强度和pH值:在最适pH时,酶的活性最强,高于或低于最适pH,酶的活性都降低。
一般采用电化学和光物理的方法
即利用反应物或产物的吸光性,用紫外分光光度法或荧光法测定。若酶反应过程中产物或反应物有气体,则可用测压仪(瓦氏呼吸仪)测定。若反应过程中生成酸,则可用电化学法。用同位素标记的底物则可用放射化学法测定底物浓度变化,计算酶活性。一些性质稳定的酶,也可用高效液相色谱法检测。
百度百科-酶活性测定
ll37配以下配制:
1、酶联板(Assayplate):—块(96孔或者48孔)。
2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3、样品稀释液(SampleDiluent):1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibodyDiluent):1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidinDiluent):1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120ul/瓶(1:100)。
7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120ul/瓶(1:100)。
8、底物溶液(TMBSubstrate):1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液(WashBuffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液(StopSolution):1x10ml/瓶(2NH2SO4)。
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