地表水叶绿素a在线比对标准
叶绿素a作为水生态系统中主要初级生产者 -浮游植物的生物量和生产力的指标，具有测定方便快速和重复性好等优点。在水生生物学研究、水质评价和富营养化水体的调查研究中叶绿素a既作为生态系统结构指标，又作为功能指标被广泛使用。
叶绿素a在红光(600以上)区域有吸收波长极值，因而用分光光度法可以测定叶绿素a的含量。由于纯叶绿素a的标准溶液较难制备，因而有许多科学工作者通过大量的工作,总结出了叶绿素a的经验公式。目前，国内介绍了两种测定叶绿素a的方法，即《环境监测技术规范(生物监测部分)》推荐的方法(三色法)和《湖泊富营养化调查规范》中介绍的方法(单色法)。
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鉴于三色法曾是监测规范中指定的方法用于叶绿素a的分析中，而单色法在GHZB1-1999《地表水环境质量标准》中被指定为叶绿素a分析的标准方法。
为客观评价叶绿素a两种分析方法监测数据的可靠性、适用性、可比性和连续性,特作此比对试验:并对此两种方法的测定结果和方法本身进行比较、讨论，以便更全面地贯彻落实。
为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护环境，保障人体健康，规范水中叶绿素a的测定方法，制定本标准。本标准规定了测定地表水中叶绿素a的分光光度法。本标准为首次发布。
叶绿素含量的测定
叶绿素a的测定实验步骤：
1、 取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。
2、 称取剪碎的新鲜样品0.2g，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。
3、取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
4、 用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至25ml，摇匀。
5、把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm下测定吸光度。
注意事项：
1、由于植物子叶中含有水分，故先用纯丙酮进行提取，以色素提取液中丙酮的最终浓度近似80%。
2、由于叶绿素A，B的吸收峰很陡，仪器波长稍有偏差，就会使结果产生很大的误差，因此最好能用波长较正确的高级型分光光度计。
实验原理：在叶绿素a和b的吸收光谱曲线中，红波波长范围内，叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b的最大吸收峰在645nm。
叶绿素含量的测定方法如下：
叶绿素含量跟光合作用速率、植物营养状况等指标密切相关，通常，我们会通过对叶绿素含量的测定，来了解植物的生长状况。一般，植物叶绿素含量测定有三种：分光光度法，活体叶绿素仪法和光声光谱法。其中分光光度法是应用最广泛的叶绿素含量测定方法。
叶绿素含量的计算：
叶绿素含量测定首先得提取叶绿体色素，叶绿体 色素中含有叶绿体a，叶绿体b，胡萝卜素和叶黄素。在提取叶绿体色素时，我们使用不同的试剂，如丙酮，乙醇等有机物。
当试剂不同时，所得到的结果也会不 同。上图中我们使用四种不同的溶剂，进行叶绿体色素的提取。图中通过对四种溶剂在600nm-700nm波长间的吸光量进行比较，从而计算叶绿素含量，而 从图中，我们可以大致得到，这四种叶绿素提取液的光吸收性质基本相同。
利用分光光度法测定叶绿素含量是依据Lambert-Beer定律，数学表达式为A=Kbc。其中，A为吸光度；K为吸光系数；b为溶液的厚度；c为溶液浓度。
叶绿素a,b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别在663nm和645nm处。叶绿素a和b在663nm处的吸光系数分别为82.04和9.27；在645nm处的吸光系数分别为16.67和45.60。根据Lambert-Beer定律，我们可以列出方程：
D663 = 82.04Ca+9.27Cb
D645 = 16.67Ca+45.60Cb
根据以上方程组，可以求得：
Ca = 12.72D663 – 2.59D645
Cb = 22.88D645 – 4.67D663
然后我们又可求得叶绿素总量CT =（D652 × 1000）/ 34.5
95% 丙酮2乙醇(匀浆)的提取效果最佳，因此，我们在进行叶绿素含量测定的时候，可以考虑运用95% 丙酮2乙醇(匀浆)作为提取液。
目前已经发明了比较方便的用于测量叶绿素含量的仪器—叶绿素含量测定仪，它是通过测量植物的叶绿素相对含量来了解土壤的性能指标和植物的硝基需求量，并了解植物的生长状况。
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