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高效液相色谱仪 色谱仪应用 液相色谱仪方法

4-甲基咪唑的液相色谱(HPLC)检测方案

1、仪器与试剂

1.1仪器、设备

高效液相色谱仪等度系统, 色谱柱:150mm×4.6mm×5μm分析天平;旋转蒸发仪分液漏斗250ml振荡器;针头过滤器微孔滤膜:0.45µm

1.2试剂

甲醇(色谱纯);无水乙醇;三氯甲烷;三氯甲烷-无水乙醇萃取液(80: 20):移取80 mL的三氯甲烷及20 mL的无水乙醇混合均匀备用。碳酸钠。碳酸钠溶液(100 g/L ):准确吸取碳酸钠100 g1 000 mL容量瓶中,用水定容至刻度。庚烷磺酸钠,磷酸二氢钾,磷酸;磷酸二氢钾缓冲液(0.05mol/L):称取磷酸二氢钾6.8g,庚烷磺酸钠1g1000ml容量瓶中,加水900ml,用稀磷酸调pH3.5,用水定容至1000ml4-甲基咪唑标准品:纯度>99 %o4-甲基咪唑标准储备溶液:准确称取0. 1 000 g 4-甲基咪唑于100 mL的容量瓶中,用流动相溶解定容至刻度。4-甲基咪唑含量1. 0 mg/mL,作为贮备溶液。

2试样溶液的制备

准确称取3g样品(精确至0. 001 g),加15mL水溶解,移入250 mL分液漏斗中,加100 g/L碳酸钠溶液15 mL,加三氯甲烷-无水乙醇萃取液60 mL,剧烈振摇5 min。静置分层后,将有机相移入另一分液漏斗中,水相再按同样方法萃取一次,合并有机相;用100 g/L碳酸钠溶液洗涤提取液3次,每次30mL。然后将有机相通过无水硫酸钠滤入旋转蒸发瓶中,50℃浓缩至近干,取下,以水溶解残渣并定容至10ml,经0.45µm微孔膜过滤后供HPLC分析。

3、色谱条件

色谱柱:C18, 4. 6 mmx250 mm,粒度5 µm

流动相:甲醇: 0. 05 mol/L磷酸二氢钾缓冲液((pH 3.5,含0. 1%庚烷磺酸钠)=5: 95

波长:210nm

流速:1. 0 mL/min

4、样品测定

标准曲线:将4-甲基咪唑标准溶液配置成一系列标准溶液,分别进标准系列溶液各10µL,进行HPLC分析,然后以峰面积为纵坐标,以4-甲基咪唑的含量为横坐标,绘制标准曲线。

样品测定:吸取10 µL试样溶液进行HPLC分析,测定其峰面积,从标准曲线查得测定液中4-甲基咪唑的含量

54-甲基咪唑的标准色谱图

hplc测定4甲基咪唑.jpg


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