饲料中维生素B1、B2、B6的测定
1 仪器及试剂
仪器
1). 分析天平一台（精度0.1mg）；
2). 超声波清洗机一台；
3). 溶剂过滤器（含泵）一套；
4). 微量进样器（100µl）一支；
5).等度高效液相色谱仪；
试剂
1). 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）；
2). 庚烷磺酸钠，优级纯；
3). 冰乙酸，优级纯；
4). 三乙胺，色谱纯；
5). 甲醇，色谱纯；
6). 维生素B2标准品：含量≥99%；
7). 维生素B2标准贮备液；
8). 维生素B2标准工作液；
提取液：在已装入约700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mgEDTA，待完全溶解后，加入25ml冰乙酸，5ml三乙胺，用去离子水定容到刻度摇匀。
流动相：在已装入700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mgEDTA、1.1g庚烷磺酸钠，待全溶解后，加入25ml冰乙酸、5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度摇匀。用冰乙酸、三乙胺调解pH至3.4±0.02，过0.45µm滤膜，取该溶液860ml与140ml甲醇混合，超声脱气，待用。
2 试样溶液的制备
称取维生素预混合饲料0.25g-0.5g，于100ml棕色容量瓶中，加入三分之二的提取液于80-100℃水浴中煮沸30min，待冷却后加入14ml甲醇，用提取液定容至刻度，混匀，过滤。维生素预混合饲料样液需由提取液进一步稀释5倍-10倍，取部分过滤液过0.45µm滤膜过滤，高效液相色谱仪分析。
3 色谱条件
色谱柱：C18 色谱柱 150mm×4.6mm×5μm；
流速：1.0mlmin；
温度：室温；
进样量：20μl
检测波长：单检维生素B2为267nm，多种维生素联检为280nm。
4 色谱图
