根据β-葡聚糖和甘露寡糖在流动相和液相色谱柱的固定相之间具有不同的分配系数，将样品注入液相色谱柱，用H2O做流动相，糖类分子流出后，经示差检测器检测，用外标法定量。
试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂；蒸馏水或去离子水或符合GB/T6682中规定的一级水或相当纯度的水。试验中所用制品按GB/T 603的规定制备。
盐酸：37%。
乙腈：色谱纯
氢氧化钠：40%。
葡萄糖和甘露糖混合标液（1000mg/L）：分别称取葡萄糖和甘露糖各0.100g，用纯水定容100mL后用0.45μm微孔滤膜过滤，备用。
仪器：水浴锅、漩涡混合器、电炉、手提式压力蒸汽灭菌锅、高压液相色谱仪、带示差检测
器。
分析步骤样品处理
精确称取1.000g（准确至0.0002g）样品放入一个20mL的耐热玻璃制的带螺帽的小试管中，加入7.5mL盐酸（37%），小心的将小瓶盖近后用漩涡混合器混合，得到均一的悬浮液。将小瓶放入30℃水浴中处理45min，每15min用漩涡混合器震荡混合一次。然后将悬浮物定量的转移到200mL杜氏瓶中（同时用约70-80mL的水洗涤后倒入瓶中），将瓶子放入高压灭菌锅121℃处理60min。完成后马上冷却，将溶液调pH到6-7，然后定容至200mL。使用0.45微米孔径的醋酸纤维素膜过滤备用。
测定液相色谱参考条件 ：
1、色谱柱：Hyper REZ XP Carbohydrate Ca++，长300mm，内径7.7mm，粒径8μm；
2、柱温：70℃；
3、流动相：H2O，用前过0.22μm滤膜；
4、流速：0.6 ml/min；
5、进样体积:40μl；
标准曲线的绘制：
分别吸取甘露糖/葡萄糖标液12.5、25.0、37.5mL到50mL容量瓶中，用高纯水定容到刻度，得到甘露糖、葡萄糖各为250、500、750、1000mg/L的混合标样。在上述色谱条件下准确进样40μl，得到色谱峰面积和标准物质量浓度之间的回归方程，绘制标准曲线。
样品的测定在同样的色谱条件下，将处理好的样品注入色谱仪中，记录各色谱峰的保留时间和锋面积。用糖标样色谱峰的峰面积来定量，计算出样品中葡萄糖、甘露糖的含量。
结果计算与表示结果计算
试样中β-葡聚糖或甘露寡糖含量X以质量分数（%）表示，按式（A.1）计算： file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image002.gif file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image004.gif……………………………………（A.1）式中：
A——根据样品溶液的峰面积，在标准曲线上查得的样品溶液的葡萄糖或甘露糖的含量，单
位为毫克每升(mg/L)；
m——样品质量，单位为克（g）；
0.2——样品处理定容的体积，单位为升（L）；
0.9——将葡萄糖或甘露糖换算成β-葡聚糖或甘露寡糖的系数。
结果表示每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果，结果保留到小数点后一位。
重复性在重复条件下或得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的10%
无公害猪用饲料添加剂研究项目工作总结
饲料销售市场上大概有三类脱霉剂：
1.蒙脱石散成份的。吸附实际效果是非常好，并且价格低，可是猪/牛/羊长期应用，非常容易刮伤肠胃，造成严重便秘，及其食材中营养元素被误吸附走，长期以往免疫力低下，提升猪群患病率。
2.草本成份的。长期运用会造成动物容易上火.严重便秘，危害胃肠作用的一切正常运行。
3.微生物菌种溶解型的。中草药材发酵技术，含有微生态制剂益生菌粉，溶解精饲料及动物身体内的霉菌毒素，随后根据排泄物排出来身体内，无耐药性没有残留。
挑选方式：要先挑选生产商具备一定整体实力.守信用的生产厂家；次之要挑选商品，在选商品的历程中需要需注意下列标准：
①：没什么副作用，迅速吸附的标准，一般的硅铝酸盐类脱霉剂在脱霉全过程中是会吸附营养元素的，但通过改性材料解决后的硅铝酸盐，因为更改了硅铝酸盐分子结构“直径”的尺寸，进而做到只吸附霉菌毒素，不吸附营养元素的实际效果；与此同时要留意多用途的吸附标准，例如既能吸附高正负极的黄曲霉，又能吸附低正负极的苞米赤霉烯酮.呕吐毒素.T-2内毒素.赭曲霉菌内毒素.伏马菌内毒素，那样效果非常的好。
②需看脱霉剂是不是具备激素调节作用，消除畜禽自身免疫病情况是现阶段行业的一大难点。例如一些脱霉剂中带有聚糖和甘露寡糖（MOS），就可以激话人体免疫系统，提升机体免疫能力，抵御微生物感柒，确保禽畜身心健康；
③尽可能挑选复合型有利活菌的脱霉剂，那样既能具有脱霉功效，又能保持畜禽肠道微生态均衡，由于现阶段养殖厂遭遇的病症风险性比较大，再再加上一部分养殖厂滥用抗菌素，中国梦后导致许多畜禽都处在身体内菌体失调情况，而有利活菌可参加机体内营养元素的消化吸收.消化吸收和生成，
如造成多种多样胃蛋白酶，推动蛋白质的消化，生成一部分维他命，参加机体氮的身体等，与此同时平稳的肠菌可以抵御外源性病菌的感柒，修补损坏的肠胃粘膜，提升肠粘膜免疫能力，因此畜禽身体内菌体失调立即会直接影响到畜禽的抵抗疾病工作能力与制造特性。
⑤挑选带有复合型营养元素的脱霉剂，可激起机体的生长发育发展潜力此外，有一些脱霉剂根据选用微生物鳌合技术性，以相对分子质量小的碳水化合物——甘氨酸为鳌合媒介，鳌合锌.锰.铜.铁等营养元素，进而确保营养元素的彻底消化吸收和运用。
抗生素的最佳替代品是什么
一、立项背景
随着社会经济发展所导致的饮食结构的变化，人们对动物食品的消费，要求养殖业的产品质量有空前提高。消费者对畜产品的要求越来越高，关注的重点是食物的安全性，要求畜产品无污染、无残留、优质、安全、营养。传统畜牧业是靠大数量、低水平，以牺牲环境和消耗资源作为代价而发展，且畜产品内有毒、有害物质的残留和污染降低了畜产品的质量，造成环境污染，危害人们身心健康。目前我国农产品和国家行业标准近700个，安全畜产品生产标准对环境质量（大气环境质量以及畜禽饮用水），生产操作规程（添加剂、兽药、农药、化肥使用准则），产品标准以及包装标准都作了相应要求，但安全畜产品合格率仍然不尽人意。农业部食品检测中心（成都）对来自川、陕、云、贵、藏、蒙等地区93－97年有绿色食品标志的畜产品进行抽检，乳粉平均合格率仅为70.3％，肉制品合格率96年度仅为83.3％；不合格项目主要是水分、微生物、杂质、有毒有害元素，其他没有绿色食品标志的畜产品情况就更加复杂，主要是农残（有机氯、有机磷、有机氮）、有害元素（以重金属为主，有机砷制剂预防疾病促生长造成环境污染，添加高铜、高锌促进生长）、兽药残留（抗生素为主）、添加剂与污染物类（色素、甜味剂、防腐剂、黄曲霉素、苯并芘等为主）、病原微生物（以大肠杆菌为主），导致畜产品出口数量只占总产量的1％，中国在2000年3月份之前的6个月共有634批出口食品因杂质、食品卫生、农药残留、食品添加剂、沙门氏菌等卫生问题被美国FOA扣留。纵观同类食品工业的产品现状，与入世后国际食品市场的要求与标准相距甚远，这与我国农业大国的经济地位极不相称，严重制约了经济的发展。生猪生产在农业经济中占很大比例，且养猪生产技术在不断兴起；但都只是从局部进行技术创新，没有把这些技术综合用于畜牧业生产，且养猪业都是以追求高饲料报酬、高生长速度，以低成本提高经济效益，对猪肉安全生产不能确保，所以必需加强这方面的研究。
无公害养猪生产技术要求猪肉无污染、无残留、优质、安全营养，可以保护自然资源和生态环境，增进人民的身体健康，是我国畜牧业发展必然之路。欧盟于1991年制定了《欧盟有机农业规定EEE2092191》法规，美国于1998年颁布了国家有机食品标准，日本农林水产省也于今年4月份颁布有机食品标识规定，我国天津、上海等地先后颁布了绿色畜产品生产标准，且国家饲料安全工程也以启动，所以发展无公害化养殖技术是我国绿色食品企业和业界人士所共同期待的。必须合理使用营养性饲料添加剂逐步减少直至取消药物饲料添加剂，使添加剂预混合饲料无污染、无公害、无残留。有机微量元素、酶制剂、酸化剂、低聚糖类合理应用，都为无公害化养猪创造了有利条件。
现在人民生活水平进一步提高，在食物消费上，越来越注重安全和质量。当今世界经济一体化进程加快，有些国家或地区如新加坡、日本、香港等土地资源有限，为减少环境污染，宁愿不养动物而依赖进口，这种趋势只会有增无减，这样的时代背景，为我们创造了极好的发展机遇，无公害猪用添加剂生产的应用国际市场前景更为广阔，为发展安全、高效、优质的绿色养猪业，全面提升我国猪肉产品的质量，在省科技厅的大力支持下，2003年**省畜牧兽医研究所、**市畜牧兽医站共同承担了《无公害猪用饲料添加剂研究》项目研究，该项目由农科院畜牧兽医研究所***副研究员主持，*****等同志参与，项目于2003年6月开始实施，至2005年3月已完成项目所规定的各项经济技术指标。
二、课题目标与主要经济技术指标
本项目研究的目的在于避免在猪日粮中有机砷、抗生素的添加，通过对功能性寡糖、有机微量元素、有机酸钙等在养猪生产中的综合使用，提高了微量元素的利用率，解决了养猪生产中的环境污染和药物残留的问题。主要达到以下指标：
1.充分利用本省饲料资源，降低饲料成本，提高胴体品质，提高经济效益5%以上。
2.猪肉达无公害标准，应达到NY/5029-2001标准。
3.15—90kg三元杂交生长肥育猪日增重725-775g，料肉比2.9：1以下。
4.通过合理调制配方，减少了重金属铜、砷、锌以及N、P的排泄，使土壤板结程度降低，可间接提高农作物产量，降低因药残对人体的影响，有效推动畜产品安全生产。
三、主要研究内容与技术措施
项目主要的研究内容为：
1.减少重金属污染的添加剂预混料技术研究；
2.前营养物质在添加剂预混料中的综合应用技术研究；
3.适合无公害养猪饲料配方综合技术研究。
项目的主要技术措施是：根据猪生理特点，提供适宜饲料配方水平，利用平衡氨基酸合理调制配方，减少氮、氨和硫化氢的排出；同时配方上注意减少重金属对畜产品及环境的污染，使用鳌合或蛋白质结合形式的高利用率微量元素替代无机矿物元素，提高生产性能，利用益生素竞争排斥病原微生物（如沙门氏菌）以及作为有益微生物的特殊营养源刺激肠道内有益菌群增殖竞争性排斥病原微生物；利用生物技术生产的外源酶加强幼畜的消化能力，从而提高氮、磷及其他矿物元素的利用率，另外利用低聚糖类调控机体微生物区系，增强免疫力，逐步控制抗生素使用，从而达到安全生产的目的。
四、课题实际完成情况
通过对功能性寡糖、有机微量元素、有机酸钙等的综合利用，课题组研制出的无公害猪用饲料添加剂配方，在替代抗生素方面的技术基本成熟，达到了减少在饲料添加剂中使用药物对人体造成的残留危害，减少了生猪的氮、磷、钙等的排泄，降低了重金属过多排泄对环境造成的污染。主要做了以下几方面的研究工作：
1.通过寡糖复配对仔猪生产性能、IgG水平、血液生化指标的影响以及在替代抗生素方面的作用研究：①果寡糖与甘露寡糖最好组合为果寡糖+甘露寡糖(0.30%+0.15%)或(0.45%+0.10%)，能提高仔猪的日增重，降低仔猪的饲料消耗。②果寡糖与甘露寡糖不同配比对仔猪腹泻也有不同程度的降低。③聚糖能诱导各种免疫功能的活化，具有免疫增强剂的功效。④果寡糖与甘露寡糖联合使用在较大程度上可替代抗生素。
2.有机微量元素对猪生产性能以及血清微量元素水平的影响：有机微量元素的不同组合，按添加高铜和普通水平铜的赖氨酸盐以及赖氨酸亚铁、赖氨酸锌，与无机组相比，提高了仔猪的日增重；有机高铜组提高了仔猪血清中的铜、铁、锌水平，降低了血清尿素氮水平，但差异不显著，且两个有机组之间，血清铜、铁、锌水平以及尿素氮水平差异均不显著，说明中等水平的有机铜组合即可以达到满足仔猪生长需要。
3．岛西神水对生长肥育猪生产性能、肉质、粪便中菌群以及血清水平的影响：饲用岛西神水组整体来讲，提高了生长肥育猪的生产性能，提高了肉的品质，极显著降低了仔猪粪便中的大肠杆菌数，增强了仔猪的免疫力。
4.在临产前一周母猪日粮中开始添加润生源、钙酶（替代等量的碳酸钙），至哺乳结束，试验组母猪日粮不添加抗生素，试验组仔猪与对照组在腹泻率、日增重、日采食量、饲料转化率等指标上差异都不显著。但试验组腹泻率下降；日增重提高；料肉比降低。
5.在生长肥育猪日粮中添加钙酶与润生源，不添加有机酸、抗生素减半或不添加抗生素，①仔猪阶段，各个试验组均能提高仔猪的日增重，提高饲料利用率。钙酶与润声源联合使用能降低粪便中钙、氮、磷的.水平；且所有含钙酶组，粪便中的钙水平都与对照组差异显著；②中、大猪阶段能够明显提高中大猪的日增重，降低饲料转化率；③钙酶与润生源联合使用在一定程度上可以部分或全部替代抗生素在中大猪中的利用。
6. 通过对有机微量元素、功能性寡糖、有机酸钙等的综合使用，①在15-90kg生长肥育猪阶段，日粮中不使用抗生素、有机砷等，试验组日增重与对照组相近,料肉比试验组比对照组略有下降。②试验组比对照组在屠宰率、眼肌面积、瘦肉率等指标方面有明显提高、降低了背膘厚度。同时，试验组比对照组猪肉的pH值有明显提高，失水率和滴水损失明显降低。肉色评分试验组为3.5分，对照组为2.5分有明显提高，大理石纹等级评分试验组与对照组无明显差异。
7．试验组猪肉各项指标均达到无公害标准，同农业部无公害猪肉标准相比，允许残留的物质远低于农业部标准。
五、推广应用及社会经济效益
本项目在边试验、边推广阶段,通过向饲料厂或无公害养殖基地提供无公害饲料添加剂，用于生产过程中，无公害基地出栏的生猪经有关部门检测，全部符合无公害标准，结果表明该产品能适应养殖生产需求，且使用该产品后，生猪的胴体品质均有所提高，容易被屠宰场和顾客接受，相对价格高0.2元/斤以上，提高了经济效益约5%。从推广以来，共向三个饲料厂(**华达牧业有限公司、**天龙饲料有限公司、**正达饲料厂)和三个无公害养殖基地（**畜牧良种场、畜牧良种场、银三角种猪场）提供约530吨预混料，累计新增产值2241.9万元，新增利税161.22万元。
六、结论与应用前景
本项目在省科技厅、省农业科学院和广大养殖户的大力支持下，通过课题组全体人员的共同努力，基本完成了课题的研究任务，本项目的研究达到国内同类研究的先进水平。
本项目研究利用有机微量元素提高猪对微量元素的利用率，解决了养猪生产中因重金属排泄造成的环境污染问题；引用氨基酸平衡模式，利用功能性寡糖、有机酸钙等，在养猪生产中的使用，降低了氮、磷、钙的排泄；同时无公害猪用饲料添加剂的使用，日粮中不添加抗生素，可确保猪的生长性能基本和含抗生素日粮没有显著差异，避免因药残对人体的危害，为大力推广无公害养猪技术创造了条件，为今后研究猪用绿色饲料添加剂打下了坚实基础。
为了减少或消除抗生素的使用，需要从以下三个方面来考虑：
（1）选择有抗菌、抑菌或杀菌活性的饲料添加剂饲料添加剂特别是抗生素替代品的合理选用，是替代抗生素的重要途径之一。例如产细菌素（微生物源抗菌肽）的有益微生物、功能性肽蛋白、酶制剂及寡糖类饲料添加剂，不仅具有改善畜禽肠道有益菌群、补充内源酶的不足、促进生长、提高免疫及抗菌抗病毒能力和提高饲料转化效率等方面的优点，而且无残留、不会产生耐药性，是抗生素的优秀替代品，联合使用上述产品，抗生素的替代效果会更好。
（2）对饲料原料进行更完善的加工处理（生物或物理加工）饲料配方的配制以及饲料原料的选择也是重要的考虑因素之一，为了减少或消除抗生素的使用，必须针对不同品种和生长阶段的畜禽配制营养均衡（能量蛋白平衡、氨基酸平衡等）且适口性好、易消化的饲料，并且在加工过程中要减少营养物质的流失等问题，来确保为畜禽提供充足的营养物质。另外，在饲料原料选择时，也可以优先选择如发酵豆粕、膨化玉米等经过一定手段处理过的易消化、易吸收的原料。
（3）改善饲养管理，创造更加清洁舒适的饲养环境由于饲养管理不善会使畜禽产生应激反应，因此，如何改善饲养管理也是如何替代抗生素的重要考虑方面。为了减少引起动物的应激，必须为其创造良好的饲养环境：设置适宜的温度；清洁空气（可以使用环境优化器，对空气进行过滤，或使用除臭剂，减少NH3和H2S等臭气的排放）；使用环境友好型消毒剂，降低环境中有害微生物的数量。
要解决抗生素所带来的一些问题，不是从某个单一方面就能完全替代掉抗生素，而是多方面综合治理的结果，需要从以上三个方面着手，才能更好地替代抗生素。
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